第二节　烟草转基因检测


　　一、检测技术开发



　　1997年初，因特网上一家国际网站称中国种植转基因烟草已达100万公顷，一些国际烟草商，特别是欧美部分跨国烟草公司，相继与中国终止了进口烟叶的合同，以质量有问题为由，要求停止备货，使全国烟叶出口数量锐减，造成了巨大的经济损失。烟叶要想出口就必须检测出哪些烟叶是转基因的，这种专业检测技术在全国还是一片1998年，烟叶检测站郭兆奎在实验室工作空白，在国际上也还刚刚起步。一家行业外的检测机构推出了一个检测结果，但由于方式、方法的错误，全国烟叶转基因占有率竟达到70％以上，这个数字公布后，对烟叶出口更加不利。为此，中国烟草进出口总公司提出：我们一定要建立自己的检测机构，弄清全国烤烟品种转基因的真实情况。



　　1998年1月，中国烟草东北农业试验站（以下简称东北站）与中国烟草进出口总公司签订了“1998年烟草种子转基因检测合同书”。1月16日检测工作正式启动，全国各地样品陆续空运到试验站，全体检测人员连续奋战22个昼夜，到1月30日（大年初三），完成了全国15个省（区）95个种子样品的检测。经过反复的多方法验证，确定有阳性反应的9个，仅占9％。首次种子检测成功，为调整全国烟叶生产计划提供了科学依据，在中国烟草发展史上填补了一项空白，实现了中国烟草转基因检测“零”的突破。同时，使国内烟叶出口量开始大幅攀升。

　　是年3月10日，美国菲莫公司（欧洲部）研究与发展中心主任嘎达尼、安诺、张明达等3位博士到检测站进行技术交流和评估。嘎达尼博士的结论是：（1）检测仪器设备与国际先进试验室同等先进；（2）检测方法步骤基本一致；（3）科技人员素质高，有经验，提出的问题很深刻。检测站的设备技术及人员水平得到国际知名专家及重点实验室的认可。随后，4月29日，英国剑桥的英美烟草公司ATC研究中心主任马丁·沃德博士再次到检测站进行技术交流。

　　是年6月1日，鉴于烟草转基因检测技术经国际评估已达到国际水平，国家烟草专卖局正式批准建立中国烟草进出口烟叶检测站。其工作任务是：适应烟草行业烟叶进出口贸易以及转基因工程产品推广及安全性的需要，侧重生物工程技术研究，承担烟草行业烟叶进出口质量检测任务，提高中国烟叶在国际市场上的竞争能力。8月16日，在牡丹江举行了中国烟草进出口烟叶检测站揭牌仪式。



　　二、检测方法

　　烟草转基因检测经过科技人员的多年实践，逐步摸索出一套检测技术，并于2001年底研制出简易程序图。见图5－1。



　　把上图的流程归纳为7个步骤：（1）取样；（2）进行样品前处理；（3）提取DNA；（4）将提取的DNA同时进行紫外波长扫描和烟草细胞核内硝酸还原酶基因序列PCR扩增，确定DNA的浓度和纯度；（5）进行共有引物35S NOS PCR检测。如果检测出有特异性条带，分为2种处置：返回样品前处理再重新提取DNA，对特异性条带通过4种方法加以验证；（6）对有特异性条带进行4种方法验证：限制性内切酶酶切、目的基因序列扩增、探针杂交、测序；（7）经过4种方法验证确认是转基因样品后，再进行定量测定，确定转移何种基因，其含量多少，尔后， 得出阳性结论。关于阴性反映的检测过程为：在第5步检测过程中，如果是无特异性条带就转入“35S NOS引物巢式PCR检测”，进行更精确测定，若35S和NOS引物巢式PCR检测仍然无特异性条带就确定为阴性结论。如果在巢式PCR检测时出现特异性条带，为排除污染所致假阳性的可能，应重新提取DNA进行检测。

　　三、检测成果

　　1998年，中国烟草进出口烟叶检测站成立后，检测成果逐年提高，成为世界检测组织关注的检测站。在检测技术方法上，首次种子检测的《烟草转基因高灵敏度检测方法》的研究成果，1999年参加了香港世界烟草博览会，列在国家烟草专卖局参展5项科技成果之首；在检测结果上，2001～2003年的4次CORESTA组织的国际烟草转基因定性盲检实验，检测准确率在100％，2003年参加的定量盲检，精确度排在参加实验的12家实验室之首，实现了真正的国际领先；在实验室建设标准上，参加实验的18家实验室中，成为5家达标实验室之一；在检测标准制定上，先后制定出《烟草种子转基因标准》《烟叶及其制品转基因的检测标准》，填补了国内空白，2001年4月被全国烟草标准化技术委员会农业技术委员会第三届第一次会议讨论通过，并认定这两项成果达到国际水平。



　　随着检测水平的提高，中国烟草进出口烟叶检测站得到了国际上的充分认可，取得了在国际上的权威地位。过去英美烟草公司一些检测样品都要空运到英国进行检测，现在他们主动要求中国给予检测，他们认为：“中国烟草进出口烟叶检测站的检测结果在国际已经得到了广泛的承认，他们的态度是认真的，数据是准确的，再送到那么远检测已没有必要。”

　　为了表彰以郭兆奎为代表的中国烟草进出口烟叶检测站的先进事迹，2005年3月，在中国科协第六届全国委员会第五次会议上，郭兆奎被授予全国优秀科技工作者称号，中国烟草学会向全国发出向郭兆奎同志学习的号召。4月28日，黑龙江省烟草学会决定在全省烟草行业内开展向郭兆奎同志学习活动。