第三节　微生物学


　　一、艾滋病及相关机会感染病原体致病机制及防治

　　I型人免疫缺陷病毒 （human immunodeficiency virus type 1， HIV－1）感染所致的AIDS （acquired immunodeficiency disease）是一种致死性疾病。控制HIV－1感染是全世界面临的重要课题。2001～2004年哈医大基础学院凌虹针对HIV流行及感染特征、侵入靶细胞的机制以及预防型疫苗的基础进行了深入研究和探讨，其主要成果：①发现了黑龙江省HIV流行毒株以B 亚型为主，并出现了CRF－07BC及AE／B这2种新的重组亚型， 其中AE与俄罗斯流行的毒株近缘。对制定本地区病毒预防及控制策略、制备疫苗的方针以及研究病毒传播的途径、进化规律提供了重要基础。②在HIV－1 侵入靶细胞过程中，病毒包膜表面的第三可变区（V3环）参与病毒与辅助受体结合，其N末端是参与结合的主要结构域，而且，由其空间构象而非线性氨基酸序列决定；在病毒感染过程中，V3环结合于细胞表面，V3多肽通过与V2 相互作用，导致病毒与辅助受体结合位点暴露增加而活化病毒包膜，并以病毒特异性性模式增强HIV－1 侵入靶细胞，促进病毒感染；同时还发现，V3区的某些个别氨基酸与病毒与辅助受体结合及病毒感染能力显著相关；介导炎症反应的分子凝血酶通过切割V3环的冠部活化病毒包膜辅助受体结合位点，增强病毒侵入靶细胞，促进病毒感染。③在筛选病毒保守中和抗原的研究中已经建立了2个重要技术平台：获得了带三聚体基序的高效表达载体；构建了一系列HIV包膜伪病毒，为研究HIV疫苗奠定了重要技术和物质基础。该成果2005年获黑龙江省科技进步奖二等奖。
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　　二、常见病毒感染性疾病的预防与治疗

　　20世纪80年代，哈医大基础学院李绍贤、谷鸿喜等进行病毒治疗肿瘤的研究。该研究采用两种方法：一是利用痘苗病毒处理肿瘤细胞，提高肿瘤细胞的抗原性后再进行免疫机体，使动物机体产生抗肿瘤的特异性免疫能力。该研究经过动物实验及各种指标检测证实痘苗病毒确实能提高肿瘤细胞特异抗原性，为临床治疗肿瘤开辟了新途径。二是利用动物肠道病毒溶解肿瘤细胞的作用和提高荷瘤机体IL－2、干扰素等细胞因子水平，调整机体免疫平衡的功能，进行肿瘤的治疗。经多年研究，进一步证实了动物（人、鹿、猪）肠道病毒的抗肿瘤作用及其免疫学机理，并对病毒的分子结构以及其使用安全性进行了探讨，对人类卵巢癌、胃癌的试验性治疗获得初步疗效。该研究为开发新的肿瘤生物学疗法奠定理论和实验基础，并推广应用于临床治疗肿瘤。该项研究在国内外杂志上共发表论文22篇，1996年获黑龙江省科技进步奖三等奖。

　　1986～1987年，哈医大基础学院马佳毓等对铜绿假单胞菌的耐药性进行了分子生物学研究，分析了铜绿假单胞菌的质粒与耐药性关系，较早的在基因水平上对该菌分型。该研究成果1999年获黑龙江省科技进步奖三等奖。1986年后，传染性疾病种类发生了很大变化，性接触疾病如淋病发病率明显上升。马佳毓等对黑龙江省、市的淋病奈瑟菌的感染情况进行了流行病学调查，进行了淋病奈塞菌的基因探针的制备和实验室诊断的研究，1992年获黑龙江省科技进步奖二等奖。
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　　中国是乙型肝炎病毒（HBV）高流行地区，人群中的感染率为8％～15％（平均10％）。哈医大基础医学院谷鸿喜等从1992年开始进行乙型肝炎病毒分子流行病学及耐药机制研究，从2001年开始与日本感染症研究所合作，在中国内蒙古、黑龙江等地区进行HBV分子流行病学调查，并获得日本健康科学基金资助。该项研究采用多引物对逆转录巢式PCR法对801份不同乙肝患者、携带者及健康人群血清检测了HBV DNA，结果患者血清HBV DNA阳性率占74.4％（442／594），健康人血清中HBV阳性率占8.4％（13／154）。对HBV DNA阳性标本464例，用型特异性多引物对巢式PCR法对HBV DNA进行了基因型分析，其结果HBV基因型总检出率以C型为主，占77.2％，其他型别依次是A型为5.2％，B型为7.1％，D型为2.4％，E和F型未检出。该项研究成果2005年获黑龙江省科技进步奖三等奖。
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　　哈医大基础学院谷鸿喜、张凤民等从1993年开始进行B组柯萨奇病毒（CVB）致心肌病变的分子病因学研究。从CVB与病毒性心肌炎和扩张型心肌病关系研究中，应用RT－PCR技术从国人猝死的病理诊断为心肌炎和扩张型心肌病的心肌石蜡包埋标本中检测到CVB RNA，结果88.89％的心肌炎和55.56％扩张型心肌病标本均可检出CVB RNA。同时，进行了中药治疗B组柯萨奇病毒性心肌炎的实验研究。从1996年起进行B组柯萨奇病毒致心肌病变的预防研究，构建了CVB3 VP1基因克隆pCR2.1－CVB3VP1和真核表达质粒pCEP4－CVB3VP1，报道中国CVB3分离株的VP1基因序列，实验发现pCEP4－CVB3VP1可在体内表达VP1蛋白，诱导动物产生抗CVB3中和抗体并抵抗CVB3攻击，证明PCEP4－CVB3VP1可用作基因疫苗控制CVB感染，该研究成果获2000年黑龙江省科技进步奖三等奖。1998～2000年，构建了CVB1 VP1的基因克隆、原核表达和真核表达CVB1 VP1，接种BALB／c小鼠，可诱导小鼠产生IgM、IgG和CTL反应，证明它可诱发体液免疫和细胞免疫，起到DNA疫苗的作用。2000～2003年，构建了柯萨奇病毒B组1型和3型二价VP1基因疫苗，血清学证实可产生CVB1、CVB3特异抗体。该成果2002年获黑龙江省科技进步奖二等奖。
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　　人乳头瘤病毒（Human papilloma－ virus， HPV）对人类健康危害大，其特点是型别多，且致病性与型别有关，高危型别（HPV16，18等）与癌症发生高度相关，哈医大基础学院谷鸿喜等自1995年开始对多个型别人乳头瘤病毒基因工程疫苗进行构建、表达及其免疫性的实验研究。本研究将致癌性最高的HPV16型L1基因和引起尖锐湿疣最常见的HPV11型的L1基因重组，构建出HPV16－ HPV11L1重组工程菌株，为将来制备既能预防宫颈癌，又能预防尖锐湿疣的双价疫苗提供实验和物质基础。 经过10年的试验研究先后获得5株单价、1株双价HPVL1基因工程菌株，证实具有高效表达L1蛋白和免疫原性。并利用表达的重组蛋白进行了血清学诊断试剂及单克隆抗体的研制。1999年获黑龙江省科技进步奖三等奖。
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　　博尔纳病病毒（Borna disease virus， BDV）是单负链RNA病毒目博尔纳病病毒科的原型病毒，具有严格的嗜神经性，几乎能感染所有的温血动物，并表现为兴奋、嗜睡、共济失调等精神神经异常，严重可致死亡，并发现，BDV感染可能与人类某些精神神经疾病如精神分裂症、癫痫、慢性疲劳综合征等有关。2001～2004年，哈医大基础学院张凤民等收集黑龙江省精神分裂症和正常人外周血样本，采用免疫印迹法和巢式RT－PCR检测样本中BDV抗体及RNA的存在情况，结果表明，精神分裂症患者外周血中BDV抗体及RNA阳性率都明显高于正常人。用基因克隆和序列分析法确定检测到的BDV核苷酸序列与已知BDV欧洲标准株核苷酸序列之间有高度的一致性。本研究结果提示黑龙江省存在BDV感染，BDV的感染可能是精神分裂症的生物致病因素之一。该研究成果2004年获黑龙江省科技进步奖三等奖。
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